تبلیغات
مقالات مهندسی پزشکی ، برق ، الکترونیک ،علوم پایه ، علوم آزمایشگاهی ، پزشکی،روانشناسی - روش کار آزمایشگاه بیوشیمی

روش کار آزمایشگاه بیوشیمی

1389/02/3 14:58

نویسنده : شهرام قاسمی
ارسال شده در: مقالات علمی آموزشی ،

روش کاردر کروماتو گرافی کاغذی:فاز ثابت فیبر های سلولزی کاغذ صافی است که توسط اب هیدراته شده است وفازمتحرک را حلال های مختلف که متناسب بانوع ماده مورد نظر استفاده میشود تشکیل میشود

کروماتو گرافی به دو صورت انجام میشود

1:بایین رونده:حرکت فاز متحرک از بالا به بایین صورت میگیرد

2:بالا رونده:حرکت فاز متحرک ازبایین به بالا   صورت میگیرد

روی خط 4 ماده 1:گزیلوس 2:مالتوز 3:فروکتوز 4:گلوکز 5:مجهول شماره 21

از هر مجهول روی خط لکه گذاری میکنیم بطوری که قطر لکه از نیم میلیمتر بیشتر نشود داخل تانک گذاشته در تانک را بسته تا خشک شود

یک کاغذ صافی وات من به ابعاد 13*22 برداشته و 2سانتیمتر از انتها خط کشیده و کاغذ با دست تماس نداشته باشد با بیبت باستور دوصدم میلی لیتر بصورت لکه گذاشته در فواصل مناسب  نک بیبت را روی کاغذ گذاشته تا لکه گذاری شود ازهر کدام از قند ها یک لکه گذاشته داخل تانک گذاشته بعد دو لبه کاغذ را طوری گرد میکنیم تالبه های ان روی هم نباشد داخل ظرف حاوی 500میلی لیتر حلال که مخلوط ایزو بروبیلیک الکل استیک اسید واب به نسبت 1-1-3 هست میگذاریم در ان را با بارافیلم یا فریزر بسته تا نسبت ها به هم نخورد حال ان را به مدت 80 دقیقه دها کرده تا بالا بیاید بعد کاغذ را برداشته وبا مداد محل ان را نقطه گذاری کرده ان را داخل اتو گذاشته تا خشک شود

برای رنگ امیزی 1 میلی لیتر انیلین 1 گرم دی فنیل امین  را در 100 میلی لیتر استون حل کرده موقع استفاده 10حجم از این محلول با یک حجم اسید فسفریک 85درصد مخلوط میکنیم برای ظاهر شدن لکه ها کاغذ رادرون محلول رنگ امیزی فرو میبریم یا محلول را روی کاغذ می افشانیم برای ظاهر شدن رنگ لکه ها کاغذ را در اتو ی  100تا 150درجه سانتی گراد گذاشته لکه ها ظاهر میشوند

مواد لازم:گلایسین+تیروزین+اب مقطر+دو لوله

یک اسید امینه+نین هیدرین

تیروزین+میلون+اسید سولفوریک+سود+هاپکینزکول+ارزنین+الفا نفتل+نیترو پروسید سدیم+اسید امینه گوگردی+هیدروکسید امونیم

:result

اسید های امینه فرمول عمومی ان یک کربن مرکزی یک امین یک ار واچ و کربوکسیل که در ان ار ریشه یا رادیکال میباشد تفاوت انها در ساختار شیمیایی بنیان ار میباشد ساده ترین انها گلایسین است اسید های امینه ترکیبات امفوتریسم اند اگر در phایزو الکتریک خود قرار گیرند (نقطه ای که باری ندارد piگویند)فاقد بار  خواهد شد پروتیین ها بلیمر اسید های امینه اند که از طریق بیوند های ببتیدی به یکدیگر متصل میشود

اگر دو اسید امینه اولین عامل کربوکسیل ودومین عامل امین خود را در تشکیل بیوندپپتیدی شرکت دهند پروتیین نقش مختلف بیو لوزیکی اند از جمله نقش انزیمی انقباضی ایمونولوزیکی انتقالی هورمونی ساختمانی ومنبع انرزی هستند حلالیت امینو اسید ها در اب متفاوت است

2 نین هیدرین :واکنش اسید امینه با نین هیدرین یک جنرال تست است چون تمام اسید های امینه و پروتیین ها با این ترکیب واکنش میدهند نین هیدرین یک اکسید کننده قوی است که با اسید های امینه الفا ترکیب شده ایجاد کمپلکس رنگی بنفش یا ابی میشود اساس ازمایش نین هیدرین سبب د امینه و دکربوکسیله شدن میشود پس الدهیدی که یک کربن کمتر از امینه مولدش دارد بوجود میاید نین هیدرین اکسید شده در مجاورت امونیاک تولید شده با نین هیدرین احیا شده تولید کمپلکس رنگی میکند

3:xanto protein:گروه فنیل موجود در اسید های امینه اروماتیک با اسید نیتریک ضعیف نیتراته شده ومشتقات نیترو بنزن به رنگ زرد تولید میکند که در محیط قلیایی نارنجی میشود

4:ازمایش millons_test ترکیبات مونو هیدراته با معرف میلون ترکیب صورتی رنگی به وجود میاورد که به مرور قرمز میشود بعضی از مشتقات هیدروکسی بنزن بخصوص مونو هیدروبنزن از قبیل فنل و تیروزین که در حلقه بنزنی خود در موقعیت اورتو نسبت به گروه ohبا جسم دیگری ترکیب نشده اند به این معرف حساس میباشد از این رو فنیل الانین را از تیروزین تشخیص داد

5hapkins_cole:جهت تشخیص تریپتوفان است زیرا اگر گروه ایندولی موجود در تریپتوفان مانند ترکیبات ایندولی وقتی با الدهید های مختلف در حضور اسید سولفوریک غلیظ قرار گیرد ایجاد کمپلکس رنگی میکند

sakahuchi6برای تشخیص ارزنین است

7 nitro prosid sodium:گروه تیولی اسید های امینه در مجاورت امونیاک  بانیترو پروسید سدیم واکنش داده وتولید رنگ قرمز بنفش میکند این ازمایش جهت تشخیص اسید های امینه گوگرد دار است

method

روش حدود 25mlگلایسین و تیروزین رادر دو لوله ریخته و به هر یک 5mlاب مقطر اضافه کرده وخوب تکان دهید

روش:3mlاسید امینه و چند قطره نین هیدرین مخلوط کرده 10دقیقه در بن ماری

روش:1ml تریپتوفان(تیروزین)+1mlاسید نیتریک غلیظ 2دقیقه بن ماری جوش که زرد میشود 2mlسود 40درصد کم کم اضافه شود رنگ نارنجی مربوط به حلقه بنزن

 روش:2mlمحلول تیروزین +3قطره معرف میلون +2دقیقه بن ماری رنگ قرمز اجری میشود

روش:1mlتریپتوفان +1mlهاپکینز کول مخلوط +1mlاسید سولفوریک به ارامی (از جداره لوله ها )اضافه کرد حلقه بنفش بین دو فاز وجود حلقه ایندولی است

روش:3mlارزنین +1mlسود 40درصد+2قطره الفا نفتل  مخلوط 4قطره اب برم کمپلکس قرمز_زرد

 روش:نیم mlامینه گوگردی +2mlنیترو پروسید سدیم +نیمmlهیدروکسید امونیوم رنگ بنفش تیره قرمز میشود

 

تشخیص کیفی قند ها:پلی ساکارید ها:با ید ترکیب شده با رنگ های مختلف دیده میشود 2mlنشاسته داخل لوله 2قطره محلول لوگل (حاوی ید)+درمورد نشاسته (پلی ساکارید )رنگ ابی بنفش تولید میشود که اگر مخلوط را بجوشانیم بی رنگ شده و پس از صبر کردن دوباره ابی میشود ید با گلیکوزن رنگ قهوه ای تولید میکند

2:هیدرولیز ساکارز :3mlمحلول ساکارز یک تکه کاغذ کنگوره اضافه کرده وقطره قطره اسید کلرید ریک میازاییم تا کاغذ به رنگ ابی در اید ph=2-3

5دقیقه میجوشانیم روی محلول هیدرولیز شده واکنش های بندیکت بارفورد سلیوانف انجام میشود بدون استفاده از کنگوره 1mlمحلول ساکارز +2قطره اسید کلریدریک غلیظ +2دقیقه حمام پس از سرد کردن روی ان واکنش های مختلف انجام میشود

مولیش:اگر مولیش مثبت بود (کمپلکس بنفش)

method

ازمایش بندیکت:اگر رسوب قرمز بود +   واگرنبود منفی است

ازمایش (شماره مجهول 12)قرمز بود از قند های گلوکز مالتوز فروکتوز سلولز میتواند باشد قرمز شد پس ادامه میدهیم

ازمایش بارفورد:ابی یا رسوب قرمز کمتر مثبت است

بارفورد:

1ml معرف بارفورد را در محلول ازمایش ریخته 2mlقند را اضافه کنید 5دقیقه حمام اب جوش رسوب قرمز در موردمونو ساکارید هادر فاصله 2 تا5دقیقه ظاهر میشود دی ساکاریدها را بایدمدت بیشتری مثلا10دقیقه جوشاند تا رسوب قرمز مشاهده شود

 اگر مثبت باشد ازمایش بیال

بیال برای تشخیص پنتوز هاست در محیط اسیدی و حرارت پنتوز ها زود تر از سایر قندها فورفورال تشکیل میدهد کمپلکس سبز یا ابی ایجاد میکند درصورتی که مدت زمان بیش از حد باشد ممکن است جواب ددهد

روش 2mlبیال در لوله ازمایش ریخته 1mlمحلول قندی 2-3دقیقه در حمام رنگ ابی تا سبز وجود پنتوز را مشخص میکند

result

 مجهول 12منفی بود پس:دیساکارید احیا کننده است پس مالتوز است

 

 

results:لیپیدها ترکیباتی اند که معمولا در اب وحلال های قطبی حل نمیشود ولی عمدتا در حلال های الی یا غیر قطبی مثل اثر الکل بنزن حل میشود این ترکیبات را از نظر وجود یا عدم وجود اسید چرب به دو گروه بزرگ تقسیم میکند یک لیپید مرکب کمپلکس که ترکیب اصلی انها اسید چرب است این گروه شامل اسیل گلیسرول تری گلیسرید فسفو گلیسرید ها اسفنگو لیپید ها وموم ها چون از هیدرولیز قلیایی این ترکیبات به دلیل وجود این اسید چرب صابون به دست می اید از این رو این چربی را خاصیت صابونی شدن saponifiable

صابونی شدن:نمک اسید های چرب میباشد باتغییر نوع اسید چرب ویا نوع قلیا میتوان  انواع صابون ها را تهیه کرد ومعمولا از چربی استفاده میشود محصول فرعی در تولید صابون گلیسرول است

2:بی رنگ شدن هالوزن ها مطابق واکنش های زیر اسید های چرب وغیر اشباع بامحلول برم ترکیب اضافی ایجاد کرده وباعث از بین رفتن رنگ برم میشود

4:زایل شدن پرمنگنات به علت اکسید شدن چربی های غیر اشباع در محل پیوند دوگانه است mnاحیا وتغییر رنگ میدهد

5:تشخیص کلسترول :یک استول حیوانی است که میتوان به روش سالکوفسکی ان را شناسایی کرد

6تشخیص گلیسرول :الکل مشترک در اکثر چربی ها میباشد وتولیو اکرولیین




دیدگاه ها : نظرات
آخرین ویرایش: - -



Check Google Page Rank

تصویر ثابت